2025年农学考研备考火热进行中,很多考生都在紧张的复习着,关于农学考研,大家都复习的怎么样了呢?为了帮助大家能够更好的复习,小编为大家整理了“2025年农学考研复习:缓冲液中的这些成分分别起何种作用”,希望能给同学带来帮助。
T4 DNA 连接酶是分子生物学实验中常用的连接酶,该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端形成磷酸二酯键。T4 DNA 连接酶反应缓冲液及反应条件如下:[50 mM Tris-HCl(pH 7.5),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP] ,16℃ 温育。
请结合酶学章节内容说明缓冲液中的这些成分分别起何种作用?
T4-DNA连接酶一种封闭DNA链上切口酶,借助ATP或NADP水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化形成磷酸二酯键。T4 DNA连接酶可催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需ATP作辅酶,不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接,也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。可应用于在粘性末端或平末端连接双链DNA分子,也可应用于修补双链DNA、RNA或DNA RNA杂交体上的缺口。
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